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从四个方面探讨荧光素酶发光成像技术的具体内容

发布时间:2023-03-20      点击次数:181
  荧光素酶发光成像是一种广泛应用于生物医学研究的成像技术,其具有较高的灵敏度和选择性,能够在活体内、细胞内以及分子水平上实现可视化成像。本文将从作用、原理、特点以及选型标准四个方面探讨荧光素酶发光成像技术的具体内容。
  一、作用
  荧光素酶(Luciferase)是一种广泛存在于生物界的酶类,在一些动物中起到生物荧光作用,荧光素酶发光成像技术利用荧光素酶与荧光素底物(Luciferin)的反应,产生强烈的荧光信号,以实现对目标区域的定量及定位等高分辨率成像。
  二、原理
  荧光素酶的反应原理是荧光素底物与ATP在荧光素酶的催化下进行氧化反应,生成二氧化碳、AMP和氧化荧光素,并释放出能量。氧化荧光素激发的荧光光子可以经过吸收器淬灭,也可以导致染料重新激发和发光,之后通过成像设备记录下来。
  三、特点
  1、灵敏度
  荧光素酶发光成像具有较高的检测灵敏度,其能够侦测到相对较弱的荧光发光,能够提供高分辨率的荧光图像。
  2、高度选择性
  荧光素酶发光成像对绝大多数背景荧光有很好的区分度,使其可以获得非常高的检测信噪比。
  3、实时性高
  荧光素酶发光成像能够以非常高的速度捕捉荧光事件,从而使荧光素酶标记物的变化能够实时呈现在屏幕上。
  四、选型标准
  在使用荧光素酶发光成像技术时,应根据实验需求选择合适的荧光素酶种类和底物。
  1、荧光素酶种类选择
  荧光素酶有多种不同的种类,应根据实验目的和样本类型选择合适的荧光素酶。例如,Firefly荧光素酶对哺乳动物细胞较为适用,但对欧文斯毒蛇等其它生物的检测灵敏度较低。因此,在选择荧光素酶种类时,应根据实验需求和样本类型选择合适的种类。
  2、荧光素底物的选择
  荧光素底物分为自发荧光和非自发荧光两种,应根据实验需求选择合适的荧光素底物。自发荧光底物能够极大提高检测的灵敏度,但在嵌合蛋白的检测中,荧光素底物的自发荧光会对测量的结果产生影响,因此应选择非自发荧光底物。
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